江西九岭山保护区毒蘑菇一新记录种
——日本红菇
穆新华1,涂 磊2,吴小冬3,赵 宽1*
(1.江西科技师范大学生命科学学院,江西南昌 330013;2.江西九岭山国家级自然保护区管理局,江西宜春 330600;
3.靖安县中医院,江西宜春 330600)
基金项目:江西九岭山国家级自然保护区大型真菌资源调查项目(H20201110131026000007);江西科技师范大学研究生创新专项资金项目(YC-2021X11);江西省自然科学基金项目(20202BABL215014)。
作者简介:穆新华(1996—),男,山东菏泽人,硕士在读。研究方向:毒蘑菇的物种多样性研究。
通信作者:赵宽(1989—),男,河南南阳人,博士,副教授。研究方向:大型食药用真菌的物种多样性与资源保护。E-mail:key1989@126.com。
摘 要:通过详细的外部形态观察、内部显微结构比对以及分子系统发育分析相结合的方法,鉴定出江西九岭山国家级自然保护区毒蘑菇的一个新记录种——日本红菇(Russula japonica)。该种的鉴别特征为菌盖乳白色,漏斗状;菌肉洁白厚实,伤不变色;菌柄白色,圆柱形,向下渐细;孢子淡黄色,近球形,具刺,淀粉质。
关键词:日本红菇;毒蘑菇;新记录种;九岭山
红菇属是常见的外生菌根菌[1-4],全球已知约有800个物种[5],我国已报道160余种[6-7],江西省已报道35种[8]。菌根菌在森林生态系统中,对于水分、碳素以及其他养分转化和能量循环起着重要作用[9]。另外,红菇属真菌多数可食用,如正红菇(R.vinosa)、美味红菇(R.delica)在全国各地被广泛食用,味道鲜美,富含蛋白质、脂肪酸、维生素等营养成分[10]。该属也不乏毒菇,如亚稀褶红菇(R.subnigricans),中毒事件时有发生[11]。同时,部分红菇属真菌,如血红菇(R.sanguinea)、毒红菇(R.emetica)则具有一定的药用价值,具有抗肿瘤、抗病毒和促进免疫等功效[12]。
本文发现并描述了江西九岭山国家级自然保护区(下称九岭山保护区)红菇属真菌一新记录种——日本红菇(Russula japonica),该物种为毒蘑菇,2020年被当地群众误食导致胃肠炎型中毒,患者在靖安县中医院就诊后,因病情轻微自愈。
1 材料与方法
1.1 供试标本
标本于2020年10月采集于九岭山保护区,拍摄新鲜标本生境照片,采样时尽量保证其完整性。详细记录标本形态特征及生境后,将其放置于烘箱中,60 ℃烘干,经干燥后保存于中国科学院昆明植物研究所隐花植物标本馆,同时保存与之配套的硅胶干燥材料,用于分子实验。
1.2 研究方法
1.2.1 形态学鉴定
标本的外部形态特征根据野外发现的子实体观察记录,包括采集地点、生境特点、采集时间以及子实体各部位结构的特征等。
标本的内部显微特征依据对烘干标本的徒手切片观察,使用5%的氢氧化钾溶液为载浮剂,在显微镜下放大100倍(油镜)下观察得到。分别随机选取30个孢子和担子进行测量,记录其形状、大小和颜色等。
1.2.2 分子系统学研究
采用生工生物工程(上海)股份有限公司生产的Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒对硅胶干燥的分子材料进行DNA提取。在查阅相关的文献资料和进行预实验的基础上[13-15],本研究选用ITS4/ITS5引物对内转录间隔区(ITS)序列进行扩增。扩增产物经凝胶电泳检测后送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序。将测得的ITS序列采用BioEdit v7.0.9打开检查序列峰形图,核对碱基是否读取正确,同时采用NCBI的在线软件BLAST对所得序列与GenBank数据库中的序列进行比对,以确保所得序列与研究对象相互对应,并按照BLAST比对结果选取重建系统发育树的基因序列。采用MEGA v7.0以最大似然法(Maximum Likelihood)和邻接法(Neighbor joining)进行系统发育分析,经1 000次重复获得统计学支持[16-18]。
2 结果与分析
2.1 形态特征
日本红菇(Russula japonica),子实体中到大型,菌盖6~14 cm,初半球形,后呈漏斗状,边缘无条纹;乳白色,表面光滑,潮湿时略黏,常伴有淡黄色至褐色的污渍。菌褶近离生,密集,幼嫩时乳白色,成熟后淡赭色,有小菌褶。菌柄圆柱形,中生,长4~6 cm,粗1.5~2 cm,由上至下渐细,基部不膨大,内部白色,海绵质。孢子长5.5~7.5 μm,
宽5.0~7.0 μm,淡黄色,近球状,表面具刺,淀粉质。担子长30~45 μm,宽7.0~11 μm,长棒状,具4小梗。模式产地为日本,夏秋季散生或群生于阔叶林地上,分布于日本[19]、中国[20]。研究标本于2020年10月10日采于江西宜春、九岭山保护区海拔300 m处。
2.2 分子系统发育分析
采自江西的标本ITS序列通过GenBank数据库中BLAST序列比对,与Russula japonica序列同源性达97%。运用MEGA 7.0软件,以最大似然法(Maximum Likelihood)和邻接法(Neighbor Joining)构建系统发育树,结果表明,两种方法建立的系统发育树型非常接近,图2为采用最大似然法建立的系统发育树。系统发育分析结果显示,采自江西的标本与Russula japonica聚在同一分枝上,支持率为99%。
3 结论
结合形态特征比对和分子系统发育分析的结果,最终确定本研究采集的标本(HKAS 105290)为日本红菇(Russula japonica),可导致肠胃型中毒。其与可食用的白乳菇(Lactarius piperatus)形态特征十分相似而容易被误食,但后者伤后泌出白色乳液、味辣[21-25]。建议在当地开展较广泛的科普宣传教育,提升群众
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认知,同时避免蘑菇中毒事件的发生。
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