高效液相色谱法测定保健食品中一新型他达拉非类似物的含量

2021-08-18 22:05:23来源：

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　　杨丽蓉12，赵海鹏2，齐衍超2，陈燕2，杨钊1.3

　　（1.青岛大学药学院，山东青岛 266071;2.潍坊市检验检测中心，山东潍坊 261000;

　　3.青岛市食品药品检验研究院，山东青岛 266071）

　　摘要∶目的∶应用高效液相色谱法测定了保健食品中非法添加的一新型他达拉非类似物（ 3-羟丙基去甲基他达拉非）的含量。方法∶采用岛津 Shim-pack GIST C1。色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相A为磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙

　　腈（60∶20 ∶20），流动相B为磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙腈（8;46;46）、梯度洗脱，检测波长230 nm，结果·3-羟丙基去甲基他达拉非浓度在11.53～92.24μg/mL范围内线性关系良好（r=1.000 0），平均回收率（n=6）为99.08??结论∶建立了保健食品中3-羟丙基去甲基他达拉非含量测定的方法。

　　关键词∶3-羟丙基去甲基他达拉非;保健食品;HPLC

　　近年来，部分不法分子将磷酸二酯酶5抑制剂 (Phosphodiesterase 5, PDE-5)类化合物非法用于提高免疫力、缓解体力疲劳的保健食品中，以获取暴利叫这类非法添加的化学物质若长期使用，非但起不到强身健体效果，甚至会损害人体健康[2]«国家食品药品监督管理局颁布的现行检验标准中涉及11种PDE-5选择性抑制剂[3],为规避检査, 不法生产者釆取添加标准外的物质囹。

　　本文釆用HPLC-DAD进行缓解体力疲劳类保健食品中非法添加筛査时，发现有1个未知结构的他达拉非类似物，经过正相硅胶薄层色谱分离纯化得到目标物后，用HPLC- MS/MS得到其相对分子质量和结构碎片，结合高分辨质谱、核磁共振氢谱数据及文献资料电经标准品对比确认，最终鉴定了目标物的结构为 6-(benzo[d][ 1,3]dioxol-5-yl)-2-(3- hydroxypropyl)-2,3,6,7,12,12a-hexahydropyrazino[ 1, 2，:1,6] pyrido[3,4-b]indole-l,4-dione(结构式如图 1 所示)。本实验釆用高效液相色谱法实现了对保健食品中该物质的定量检测。

　　1资料与方法

　　1.1 一般资料

　　高效液相色谱仪(Ultimate3000型，Thermo)；超声波清洗器(KQ-700VDE型，昆山超声仪器有限公司)；XSE- 205DU 电子天平(METTLER TOLEDO )»

　　甲醇(色谱纯)，乙腊(色谱纯)，三乙胺(国药集团化学试剂有限公司，99.0%),磷酸(国药集团化学试剂有限公司，85.0%) , 3-羟丙基去甲基他达拉非对照品(加拿大 TLC药物标准品有限公司，商品名：Tadalafil Impurity 37, 纯度：99.4%)；保健食品(批号：20190425)为潍坊市奎文区市场监督管理局提供的样品。

　　1.2方法

　　1.2.1色谱条件

　　Ultimate3000型高效液相色谱仪，色谱柱：岛津Shimpack GIST Ci8 色谱柱(4.6 mmx250 mm, 5 gm)；进样量： 10 gL；柱温：35 °C；检测波长：230 nm,二极管阵列检测器；流动相A为磷酸三乙胺溶液(取三乙胺7 mL用水稀释至 1 000 mL,用磷酸调pH至2.8)-甲醇-乙腊(60 : 20 : 20), 流动相B为磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙腊(8 : 46 : 46), 梯度洗脱；1 - 12 min,流动相A为100%； 25〜30 min, 流动相B为100%； 31〜36 min,流动相A为100%；流速： 1.0 mL/mino

　　1.2.2溶液的制备

　　(1)供试品溶液制备。精密称取lg供试品，置于50mL 容量瓶中，加甲醇适量，超声处理15 min,用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

　　(2)对照品溶液制备。精密称取3-羟丙基去甲基他达拉非对照品9.28 mg(纯度为99.4%),于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为92.24 ng/mL 的对照品溶液。

　　2结果与分析

　　2.1线性关系

　　精密吸取1.2.2 (2)对照品溶液2.5 mL、5.0 mL, 10.0 mL 和15.0 mL,分别至20 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，按“1.2.1”色谱条件进行测定，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，计算得线性方程为Y=33.677X+14.4，r=1.0000，,表明3-羟丙基去甲基他达拉非浓度在11.53〜92.24 ug/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

　　2.2精密度试验

　　取同一供试品溶液，按“121”项下色谱条件下连续进样6次，3-羟丙基去甲基他达拉非含量的RSD为0.3%。

　　2.3加样回收率试验

　　精密称取已知含量的同一批保健食品(20190425)6份各 0.5 g,分别加入3-羟丙基去甲基他达拉非对照品溶液10 mL (浓度为0.115 3 mg/mL)按1.2.2 (1)制备供试品溶液，按 “1.2.1”色谱条件进行测定，进行回收率考察，平均回收率为 99.08%, RSD为1.10%(户6),表明本方法测定3-羟丙基去甲基他达拉非准确率较高(表1)。