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超高效液相色谱法测定茶叶中的儿茶素

2021-08-15 21:40:35来源:

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  超高效液相色谱法测定茶叶中的儿茶素
  崔利辉 '.胡 娜 2,李璐琦
  (1.杨凌职业技术学院,陕西杨凌 712100;2.铜川市食品药品检验检测中心,陕西铜川727000;
  3.西北农林科技大学 生命科学大型仪器共享平台,陕西杨凌 712100)
  基金项目:2020年杨凌职业技术学院校内基金项目'‘食品中多种抗氧化剂的快速检测研究"(ZK20-61)。 作者简介:崔利辉(1987—),男,汉族,陕西杨凌人,硕士,助教。研究方向:食品质量安全检测。
  摘 要:建立超高效液相色谱法测定茶叶中 7种儿茶素类茶多酚,通过调整流动相乙 <-0.1%甲酸溶液梯度,优化了 分离度,进行了加标回收试验,结果表明,在 10 - 100 ug/mL范围内, 7种儿茶素的峰面积呈现良好的线性关系,相关 系数不低于 0. 999,检出限为 6.1 ~ 97.8 mg/kg,加标回收率 93. 1 ~ 96.8%,相对标准偏差在 1. 7% ~ 3.3%。该方法具有 分析时间短,回收率、精密度高的优点。
  关键词∶超高效液相色谱;儿茶素;茶叶
  茶叶中富含多种营养成分『气有效成分的含量和种类 对茶叶的品质至关重要。茶叶中主要的抗氧化活性成分为 茶多酚伊勺,约占茶叶干重的20%〜30%。除此之外,茶 多酚还具有抗氧化、抗癌、抑菌、降压和降脂团等保健功 效。茶多酚主要包括黄酮类、黄酮醇、儿茶素类、黄青素 类、酚酸类等物质,其中儿茶素类含量最高,占茶多酚的 60%〜80%。儿茶素回包括儿茶素、表儿茶素、表没食子 儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素、 没食子酸和咖啡因等。
  茶多酚中儿茶素类化合物的检测方法多为液相色谱法, 如GB/T 8313—2018,高效液相色检测方法分析时间较长, 试剂消耗量较大。本研究在此基础上,利用超高效液相色谱 法建立了同时测定7种儿茶素茶多酚定量方法,方法分析速 度快,操作简单,可用于茶叶中儿茶素类的测定。
  1材料与方法
  1.1仪器与设备
  LC30A超高效液相色谱仪(日本岛津公司)、MS3涡旋 震荡器(德国IKA公司)、Allegra64R低温高速离心机(美 国贝克曼公司)、ME204电子天平(瑞士梅特勒公司)。
  1.2材料与试剤
  乙睛、甲醇(HPLC级,美国天地),甲酸(HPLC级, 阿拉丁),水(实验室自制超纯水)。对照品:没食子酸、表 没食子儿茶素、儿茶素、咖啡碱、表儿茶素、表没食子儿茶 素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯(纯度>98%,北京坛 墨质检)
  1.3实验方法
  1.3.1标准溶液的制备
  混合标准溶液:准确称取各标准物50 mg,混合后用甲 醇溶解稀释定容至50 mL,配制成浓度为l.OOmg/mL的混 合标准储备液;分别取1 .OmL、2.0 mL、5.0 mL、8.0 mL 和10.0 mL储备液用甲醇稀释定容至100 mL,配制成浓度 为 10.0 ng/mL> 20.0 ng/mL、50.0 p.g/mL> 80.00 ng/mL 和 100.0 ng/mL系列混合标准工作液。
  1.3.2样品处理
  称取约0.2 g(0.000 1 g)茶叶样品于10 mL离心管中,加 入5 mL 70%甲醇,40 °C下超声提取30 min(每间隔10 min 涡旋1 min) , 8 000 r/min离心5 min,重复提取1次,合并 两次溶液于10 mL容量瓶,混匀后吸取l.OOmL用水1 : 1 稀释后过0.22 gm尼龙滤膜,液相色谱测定。
  1.4色谱条件
  色谱柱:Shim-pack XR-ODS HI(2 mm><75 mm, 1.6 pm); 流速:0.5 mL/min;进样量5 gL,柱温40 °C;流动相A: 0.1%甲酸乙腊溶液,流动相B: 0.1%甲酸水溶液;洗脱程序 (A) : 0 ~ 1 min, 5% 升至 95%, 4.5 min 维持 95%; 7.0 min 降至70%维持至8 min;检测波长:280 nm;检测器釆集频 率:100 ms;外标法定量。
  2结果与分析
  2.1洗脱程序优化
  本文釆用的超高效液相色谱法测定茶叶中儿茶素类和咖 啡碱,色谱峰较窄,为获得较高的重复性,设定的紫外检测 器检测频率为100 ms,进样量5 hL,以保证的每个峰的釆 集点数多于20个,且峰较窄,更有利于分离;乙腊和甲醇 相比较,乙睛能有效的降低柱压,得到更窄的色谱峰,响应 强度更高,有利于提升检测灵敏度,能较好的分离7种化合 物,分析时间小于8 mm,色谱图如图1所示。
  2.2标准曲线及定量限
  按照确定的样品预处理方法和液相检测条件,依次测 定浓度 10.0 mg/L> 20.0 mg/L> 50.0 mg/L、80.00 mg/L 和 100.0 mg/L,混合标准系列工作溶液,得到线性回归方程, 线性关系良好。以20 mg/L浓度的混标标准品溶液进行液相 分析,以各目标峰的信噪比(SIN 2 3)分别确认7种儿茶素 的检出限,如表1表示。
  2.3准确度和精密度
  选择样品测定6次,计算目标物含量后,于0.2 g样品 中加入0.2 mL 100 mg/mL,按确定的方法进行处理(”=6), 计算加标回收率和精密度,见表2。
  3结论本研究基于超高效液相色谱法建立了一种处理简单、快 速、准确定量分析茶叶中没食子酸、表没食子儿茶素、儿茶 素、咖啡碱、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯和表儿 茶素没食子酸酯7种茶多酚方法,与GB/T 8313—2018相比, 优化了色谱条件,提高了检测灵敏度,缩短了检测分析时间。
  结果显示,本方法可以在8 min内完成7种茶多酚的检 测,具有良好的准确度和精密度,在10〜100mg/L范围内, 信号响应值呈现良好的线性关系,线性相关系数大于0.999, 检出限为6.1〜97.8 mg/kg,加标回收率93.1%〜96.8%, 相对标准偏差在1.7〜3.3%o
  参考文献
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  [2]王奕霏,王珊姗,陈丰,等.高效液相色谱法测定茶 叶中有效成分含量的方法综述[J],化工设计通讯,2020,46(6): 156-158.
  [3]林清霞,王丽丽,杨军国,等.基于DPPH法的茶叶 儿茶素类抗氧化谱效关系研究[J],福建农业学报,2020,35(2): 210-216.
  [4]白亚欣,侯彩云.几种茶叶生化成分及其抗氧化活性 分析[J],中国食物与营养,2020,26(1):31-36.
  [5]张建勇,王伟伟,王蔚,等.茶多酚■保健及药理功能 的应用[J],中国茶叶,2020,42(12):9-15.
  [6]王芬,裴会敏,陈志,等.茶多酚■功能及代谢机理研 究进展[J].现代食品,2020(14):21-22.
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