反相高效液相色谱法测定食品中的甜蜜素

2021-08-15 17:11:15来源：

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　　反相高效液相色谱法测定食品中的甜蜜素

　　刘晓燕

　　（北京世纪科环生态农业研究院，北京 101102）

　　摘要∶建立高效液相色谱法检测食品中甜蜜素的分析方法。利用甜蜜素在强酸环境下经过衍生、萃取等工艺处理，采用高效液相色谱分离。结果表明，在1.0～10.0 mg/L范围内，甜蜜素标准溶液线性回归方程 y=3 896.1x+1 668.3，相关系数为0.999 3。样品添加回收率为84.3??105.0??测定结果的相对标准偏差（n=6）1.66??1.81??检出限为0.5 mg/kg。该方法快速、简便，在食品检验中具有实际应用价值。

　　关键词∶甜蜜素;衍生;液相色谱

　　甜蜜素，化学名为环己基氨基磺酸钠，是一种应用广泛的食品添加剂叫我国国家标准《金博宝188官网注册国家标准食品添加剂使用标准》(GB 2760—2014) [2]中对甜蜜素的添加种类、添加量做了规定，但市场上超量、超范围使用甜蜜素的情况经常发生。目前《金博宝188官网注册国家标准食品中环己基氨基磺酸钠的测定》(GB 5009.97—2016) [3]的检测方法主要是液质串联质谱法、气相色谱法和液相色谱法。本文在酸性条件下对样品进行提取，利用次氯酸钠衍生将甜蜜素转化为N, N-二氯环己烷，以正庚烷萃取后用高效液相色谱法测定，减少了干扰，方法简单、快速、检出限低。

　　1材料与方法

　　1.1仪器与试剂

　　仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪配二极管阵列 (PDA)检测器；分析天平；恒温水浴锅；离心机；0.22呻针头微孔滤膜过滤器；超声波振荡器；艾杰尔ASB-C18色谱柱：250 mmx4.6 mm, 5.0 pm。

　　试剂：甜蜜素标准品(10tng/mL)；硫酸、次氯酸钠、盐酸、碳酸氢钠为分析纯试剂；乙腊、正庚烷、甲醇为色谱纯试剂；水为超纯水。

　　1.2供试样品

　　面包，购自超市。

　　1.3色谱条件

　　LC检测器为PDA；实验过程釆用乙腊+水(70%+30%) 以1.0 mL/min的流速洗脱；色谱柱为艾杰尔ASB-C18 (250mmx4.6mm, 5.0)xm)；在波长为 314 nm、柱温为 40 °C 的条件下进样；进样量为10pL。

　　1.4标准溶液的制备

　　准确移取浓度为10 mg/mL的标准物质溶液1.0 mL,用水定容至10 mL配制成甜蜜素标准储备液1 000 ng/mLo

　　甜蜜素标准曲线的制备，准确移取甜蜜素标准中间液 0.10 mL, 0.20 mL、0.50 mL、0.80 mL 和 1.0 mL 于 10 mL 容量瓶中制成浓度为 1.0 mg/L、2.0 mg/L, 5.0 mg/L、8.0 mg/L 和10 mg/L的标准使用溶液，用于衍生后，测定。

　　1.5标准曲线工作液的衍生

　　将制备好的标准曲线工作液10 mL进行衍生。先加入5% 次氯酸钠溶液2.0 mL后，再加入正庚烷6.0 mL,硫酸溶液 3.0 mL,涡旋混句静止后待分层，除去水层，在正庚烷层加入5%碳酸氢钠溶液25 mL,涡旋混匀静止取上层经有机滤膜(0.22 pm)过滤，上机检测。

　　1.6样品的提取

　　称取5 g样品(精确到0.01 g)于塑料离心管中，准确加入25mL 0.1 mol/L的HCL溶液，超声30 min后加入5 mL 正己烷剧烈振荡用于除去样品中的油脂，5 000 r/min离心 5 min,取出水层后备用。

　　1.7样品的衍生

　　取样品10 mL,制备后按照标准曲线衍生方法进行同样操作。涡旋混匀静止取上层经有机滤膜(0.22 pm)过滤，上机检测。

　　2结果与分析

　　2.1提取溶液的选择

　　直接用水提取会提取和目标物相似的结构化合物，衍生后会出现杂乱峰影响判断。实验发现酸化水溶液和正己烷的混合溶液提取效果最好，部分样品内含有油脂，在提取样品的过程中会产生油脂包裹化合物的情况。以面包样品为基质添加水平为2.5 mg/kg的标准溶液进行实验，不同溶剂的回收率差异见表1。

　　2.2色谱条件的选择

　　将甜蜜素的衍生物标准溶液在紫外分光光度计上 200〜350 nm的范围内进行扫描测定，综合考虑吸收峰值、干扰峰等因素，最终选取检测波长为314皿。此峰值基线稳定、吸收值高且峰型满意。

　　流动相的选择，比较了不同比例的甲醇：水(85%+15%,

　　V: V)、乙腊：水(90%+10%,V : V)、甲醇:水(70%+30%,

　　V： V)、乙精：水(70%+30%, V ： V),发现乙睛:水 (70%+30%, V : V)杂质干扰小，基线处于平稳的状态。经液相色谱分离后，甜蜜素的衍生物N,N-二氯环己胺能得

　　到良好的分离，保留时间为6.895 min,峰形满意。如图1 所示。

　　2.3线性范围和检出限

　　对衍生后 1.0 mg/L、2.0 mg/L> 5.0 mg/L、8.0 mg/L 和 lOmg/L甜蜜素标准工作曲线进行测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。标准曲线如图2所示。从标准曲线上得出甜蜜素衍生物标准溶液的峰面积与浓度在1.0〜10 mg/L范围内呈线性关系，其线性回归方程戶3 896.1X+1 668.3,相关系数为0.9 993,外标法定量，方法的检出限为0.5 mg/kgo

　　2.4样品测定

　　从图3可以看出，面包中不含有甜蜜素衍生物，在 2.5〜5.0 min有较强的溶剂峰，基线比较平稳，没有其他干扰。