□ 马永飞 刘锴 张巍 灌云县综合检验检测中心

□ 谢观雷(通信作者) 江苏智盛环境科技有限公司

□ 刘朕 江苏省水文水资源勘测局淮安分局

摘　要：本文采用QuE-UPLC/MS/MS法测定猪肉、草鱼、牛奶、蜂蜜等动物源性食品中氯霉素、甲砜霉素的残留量。该方法使用乙腈作为提取溶剂，样品经搅匀、涡旋、振荡、离心、净化处理后上机分析。本方法的优点体现在样品前处理方法简易、省时，能够同时检测氯霉素和甲砜霉素两种目标组分，在节省了检测时间的同时降低了基质效应;氯霉素和甲砜霉素的回收率均可达到85%以上，确保了实验结果的准确性和重现性;氯霉素和甲砜霉素的检出限均为0.1μg/kg，优于《可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》(GB/T 20756-2006)的检测方法。

关键词：氯霉素 甲砜霉素 残留量 QuE-UPLC/MS/MS

氯霉素又名氯胺苯醇，是一种广谱抗菌素，可有效抑制革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌等多种病原菌[1]。由于氯霉素具有面世时间早、药性稳定、价格便宜等优点，曾被广泛应用于畜禽疾病的控制与治疗[2]。但是，食品中残留的氯霉素会对人体健康造成威胁，如可逆性骨髓抑制、神经系统受损等，故西方发达国家已将氯霉素列为违禁药物[3]。我国现行有效标准《动物源性食品中兽药最高残留限量》(农业部第235号公告)中也明确规定，氯霉素在动物源性食品中不得检出[4]。甲砜霉素是氯霉素的同类物[5]，其抗菌谱和抗菌作用与氯霉素相仿——具有广谱抗微生物作用，可有效杀灭流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌[6]。作为氯霉素的替代品，甲砜霉素能有效克服氯霉素导致的再生障碍性贫血的副作用[7]，故被广泛应用于动物源性食品的生产以防治畜禽由流感杆菌、大肠杆菌、沙门菌属感染导致的呼吸系统、肝胆系统、泌尿系统和消化系统疾病[8]，但甲砜霉素残留量过高也会对人体健康造成危害。因此，全球各国分别制定了甲砜霉素在肉类食品中的最高残留限量[9]。我国农业部第235号公告中规定，食品中甲砜霉素的最大残留限量为50μg/kg。

由于动物源性食品中氯霉素类药物残留量超标会影响肉、蛋、奶等食品的安全性，不仅会对人体健康产生危害，还不利于我国养殖业的健康发展，更会对我国农产品的出口造成不利影响[10]。因此，开发一种简便、高效、安全的氯霉素类兽药残留检测方法已迫在眉睫。本研究利用QuE-UPLC/MS/MS法测定草鱼、猪肉、牛奶、蜂蜜等动物源性食品中氯霉素类药物的残留量，希望能对相关检测工作起到借鉴作用。

1 材料和方法

1.1 所需仪器设备和试剂样品

1.1.1 仪器设备

Waters Xevo TQD三重四极杆液质联用仪，沃特世公司;ME204T分析天平，梅特勒-托利多集团;EPED-PLUS-E3超纯水机，南京易普易达科技发展有限公司;HD-2500多管漩涡混合仪，杭州佑宁仪器有限公司;MV5多通道平行浓缩仪，北京莱伯泰科仪器股份有限公司。

1.1.2 试剂样品

市售草鱼、猪肉、牛奶、蜂蜜等动物源性食品;色谱纯乙腈，氯霉素、甲砜霉素标准品，坛墨质检;ProElut QuE 2mL Tube固相萃取净化管、0.22μm ProMax尼龙针头式滤器，迪马科技。

1.2 操作方法

1.2.1 提取

1.2.1.1 猪肉、草鱼、蜂蜜样品

依次在15mL离心管中加入5.0g待测样品、2.0g NaCl，搅拌均匀后加入5.0mL乙腈，在多管漩涡混合仪中涡旋混匀1min。振荡5min，8000rpm下离心3min，取1mL上清液待净化。

1.2.1.2 牛奶样品

在15mL离心管中加入5.0g待测样品、2.0g NaCl，搅拌均匀后加入2.5mL乙腈，在多管漩涡混合仪中涡旋混匀1min。振荡5min，8000rpm下离心3min，取1mL上清液待净化。

1.2.2 净化

将1mL提取液转移到ProElut QuE 2mL Tube固相萃取净化管，涡旋混合30s。10000rpm下离心1min，取上清液500μL于浓缩管中，加水100μL，涡旋混匀，室温下氮吹至剩余约100μL溶液，加水定容至500μL，混匀，过0.22μm微孔滤膜，进LC-MS/MS分析。

1.2.3色谱条件

1.2.3.1 UPLC条件

色谱柱C18：100×2.1mm，1.8μm;流速：0.2mL/min;进样量：5μL;柱温：35℃;流动相A：10mmol/L乙酸铵，流动相B：乙腈;实验梯度洗脱程序设置参数如表1。

1.2.3.2 质谱条件

电离模式：ESI;扫描方式：负离子扫描;检测方式：多反应监测;电喷雾电压：-4500V;雾化器压力：50psi;辅助气气压：50psi;气帘气压力：20psi;离子源温度：500℃。

2 结果与讨论

2.1 提取溶剂的选择

查阅文献可知，氯霉素类药物残留的提取剂有乙腈、乙酸乙酯[11]、水[12]等，本实验比较了3种不同的提取溶剂对提取效果的影响。实验数据表明，以乙腈作为提取溶剂时，提取效果优于乙酸乙酯和水，故本实验选用乙腈作为提取溶剂。

2.2 色谱条件的优化

本研究分别以10mmol/L乙酸铵-乙腈、水-甲醇[13]、水-乙腈[14]为流动相，按照“1.2.3.1”中的梯度洗脱条件进行检测。由实验结果可知，以10mmol/L乙酸铵-乙腈作为流动相时对氯霉素、甲砜霉素的分离效果最好，色谱峰尖锐、对称，响应灵敏度最高。

2.3 标准曲线和检出限

本实验目标组分在0.25~50μg/kg的范围内线性关系良好，回归方程y=0.0084x+0.0366，相关系数R2=0.9932。采用在空白猪肉样品中添加目标组分的方法，依据GB/T 27415-2013[15]的规定计算得出本实验最低定量限在0.25μg/kg，检测限为0.1μg/kg。

2.4 精密度和回收率试验

分别向空白草鱼、猪肉、牛奶、蜂蜜等样品中添加2个浓度水平的氯霉素、甲砜霉素标准溶液，进行回收率实验，结果见表2。氯霉素、甲砜霉素的回收率分别为85.8%~96.4%，87.3%~97.1%，相对标准偏差为0.8%~1.3%。

3 结论

本文建立了一种动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定方法，即采用乙腈作为提取溶剂，样品经搅匀、涡旋、振荡、离心、净化处理，然后上机分析。本方法的优点为，样品前处理方法简易、省时，并且能够同时检测氯霉素和甲砜霉素两种目标组分，在节省检测时间的同时降低了基质效应;氯霉素和甲砜霉素的回收率均达到85%以上，确保了实验结果的准确性和重现性;氯霉素和甲砜霉素的检出限均为0.1μg/kg，优于国家标准GB/T 20756-2006的检测方法。

参考文献：

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[2] 蔡梦迪，蔡波，郑添裕.食品中残留氯霉素的检测方法研究[J].科技风，2015(12):142-143.

[3] 戴华，王美玲，李拥军，等.饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素含量的HPLC测定方法[J].光谱实验室，2006(06):82-86.

[4] 农业部畜牧兽医局.农业部发布动物性食品中兽药最高残留限量[J].中国兽药杂志，2003，25(2):5-11.

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[13] 陆桂萍，曲斌.固相萃取-UPLC-MS/MS测定鸡肉中的氯霉素残留[C].中国畜牧兽医学会动物药品学分会第四届全国会员代表大会暨2011学术年会论文集.2011.

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[15] GB/T 27415-2013《分析方法检出限和定量限的评估》[S].