不同干燥方法对铁皮石斛多糖和甘露糖含量的影响

2019-03-27 12:17:07来源：金博宝188官网注册导刊

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摘要：通过真空冷冻、红外线、微波及烘干四种方法干燥铁皮石斛，利用高效液相色谱法对甘露糖含量进行检测；利用比色法对多糖含量进行检测，对比不同干燥方法对铁皮石斛甘露糖及多糖含量的影响。结果真空冷冻干燥样品中保留了最高的甘露糖及多糖含量，而且较其他三种干燥方法更优（P<0.05）。是干燥铁皮石斛最理想方法。

关键词：甘露糖；多糖；铁皮石斛；干燥方法

　　铁皮石斛干燥茎或者新鲜茎又被称为“铁皮兰”，具有生津益胃、润肺止咳的作用。铁皮石斛活性成分以多糖为主，包括抗炎、免疫功能增强等。铁皮石斛鲜药保存难度较大，加热烘干处理期间，其品质及药物作用效果通常受到不同程度的影响。针对不同干燥方法对铁皮石斛甘露糖及多糖的影响进行探析。

　　研究资料与方法

　　研究资料

　　试材：选取本区新鲜铁皮石斛、无水葡萄糖、D-甘露糖标准品、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮和氨基葡萄糖盐酸盐。

　　仪器：ALPHA1-2LD真空冷冻干燥机、WS70-1型红外线快速干燥器、NN-K5440MF微波炉、DHG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱、LD4-8型低速台式离心机、UV-2550紫外线可见光光度计。

　　方法

　　铁皮石斛不同干燥方法。选取新鲜石斛茎30g，将其切成若干小段每段0.5cm。

　　烘干干燥：平摊至温度为65℃的鼓风干燥箱中干燥72h，在其含水量是1.945%后将其制成粉末。红外线干燥：平摊于红外线快速干燥机中干燥7h，在含水量是1.747%后制成粉末。微波干燥：平摊置于微波炉中干燥10min，在含水量检测为1.856%后制定粉末。真空冷冻干燥：置于-20℃冰箱中预冻2h，然后平摊置于真空冷冻干燥剂干燥72h，含水量检测为1.999%后制成粉末。

　　检测石斛多糖含量。苯酚-硫酸法获取标准曲线：精密称取9mg无水葡萄糖，定容到100mL，精密量取1.0、0.8、0.6、0.4、0.2mL，每个补水到1.0mL，在波长为480mm条件下，通过紫外线分光光度计对吸光度值进行检测。横坐标（x）为质量浓度，纵坐标（y）为吸光度值，对无水葡萄糖标准曲线进行绘制，获取现行方程：y=9.226x+0.0418（r=0.9997）。

　　制备样品溶液：采取精密仪器称取0.3g样品粉末，添加去离子水200mL，加热回流2h，定容到250mL后，抽取2mL滤液，添加无水乙醇10mL，以每分钟4000r的速度离心20min，将上清液去除，待沉淀后采用80%乙醇清洗2次，8mL/次，沉淀后通过热水溶解，定容到25mL，获取样品多糖水溶液。

　　通过苯酚硫酸法对多糖含量进行检测：采取精密仪器称取1.0mL样品溶液，精密添加1mL的5%苯酚溶液，均匀摇晃，然后添加5mL硫酸，在沸水浴中积热20min，放置于冰浴中冷却5min，然后对样品溶液中吸光度值进行检测，并对铁皮石斛多糖含量进行计算。

　　检测甘露糖含量。色谱条件：XDB-C18柱；流动相为乙腈-0.02mol/L的乙酸铵溶液；波长及流速分别是250mm和1.0mL/L；柱温及进样量分别是30℃和5μL。

　　制备标准品溶液：将氨基葡萄糖盐酸盐0.6g加水定容到50mL视为内标液。选取10mgD-甘露糖放入至100mL容量瓶中，并谈价内标液1mL，均匀摇晃，定容到刻度线，选取100μL联合400mL的0.5mol/L PMP甲醇溶液及400mL的0.3mol/L NaOH混合液，将其置于70℃水浴中保温100min。然后添加500μL的0.3mol/L HCl，均匀摇晃，采用2mL三氯甲烷进行清洗3次，过水膜，选取5μL样品液，将其置于液相色谱仪中，将色谱图记录下来，对D-甘露糖及内标峰面积进行检测。

　　制备样品溶液：选取0.12g样品粉末，分别添加200mL的80%乙醇，在索氏提取器中加热回流4h，在烧杯中添加100mL水及2mL内标液，煎煮1h，冷却后定容到100mL，均匀混合，离心，获取样品提取液，抽取1mL上清液，并将其放置在空瓶中，添加3.0mol/L HCl 0.5ml，缝合，混合摇匀，置于110℃水肿水解1h，冷却后，通过3.0mol/L NaOH对PH进行调整直至中性，获取样品水解液。抽取样品400μL水解液，添加0.5mol/L PMP甲醇溶液，然后抽取5μL样品溶液将其置于液相色谱仪中，将内标峰面积和甘露糖记录下来，并对甘露糖含量进行计算。

　　观察指标

　　比较不同干燥方法对铁皮石斛多糖及甘露糖含量的影响。

　　统计学方法

　　应用统计学软件SPSS19.0处理本次研究中的计量资料（ ±s）和计数资料（%），分别采用t和x2进行检验，组间对比检验值为P，若P<0.05则代表差异呈统计学意义。

　　结果

　　3重复测定，均P<0.05。真空冷冻干燥法甘露糖382.1±35.1mg/g，总多糖430.2±20.4mg/g，最高；红外线干燥法甘露糖265.7±8.8mg/g，总多糖262.5±24.2mg/g，最低；微波干燥法甘露糖348.7±20.4mg/g，总多糖394.5±7.1mg/g；烘干干燥法甘露糖303.7±15.4mg/g，总多糖364.8±17.4mg/g。

　　讨论

　　铁皮石斛加工期间，相对重要的一个阶段是干燥，经过本次试验结果可知，不同干燥方法获取的铁皮石斛中甘露糖及总多糖含量存在明显差异。其中，真空冷冻干燥方法未显著影响铁皮石斛中甘露糖含量、多糖含量，然后是微波干燥及烘干干燥，其中影响最大的是红外干燥方法。

　　多糖是铁皮石斛中有效的活性成分，其同样是研究铁皮石斛中最多的一种其主要功效包括降血压、免疫调节和抗肿瘤等，铁皮石斛的药理作用与多糖含量有关。铁皮石斛的主要成分是甘露糖，甘露糖属于已糖结构，不会吸收紫外线。本次研究铁皮石斛多糖酸水解形成甘露醇，通过与PMP发生衍生化形成苯基衍生物，利用高效液相色谱法对其含量进行检测可知，多糖含量与其含量呈正相关。

　　真空冷冻干燥技术具有低温脱水的的特点，基本不会改变物料自身生物状态、化学状态及物理状态，从而保留大部分有效营养物质。红外干燥技术、烘干干燥技术及微波干燥技术利用高温加热实现红枣，尽管具有较快的干燥速度和较高的效率，但是干燥期间，很容易破坏热敏性物质，而且很容易导致物料恢复。

　　总而言之，4种干燥方法中，对铁皮石斛中甘露糖及多糖含量影响较小的是真空冷冻干燥方法，其同样是干燥铁皮石斛最理想方法。

　　参考文献：

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　　郑显义内江职业技术学院

　　作者简介：郑显义，男，四川内江人，硕士研究生，内江职业技术学院，研究方向：食品加工储藏。