摘　要：玉米赤霉烯酮又称F-2毒素、ZEA，主要会污染玉米、小麦、大麦、小米、大米和燕麦等谷物。本文主要通过对国标检测方法的优化，对浓缩重溶等方式建立分析方法，保证了上机检测浓度，提高了检测效率，使回收率和精密度均满足国标GB/T 27404-2008的要求。
关键词：玉米赤霉烯酮　玉米　高效液相色谱法
玉米赤霉烯酮又称F-2毒素、ZEA，主要会污染玉米、小麦、大麦、小米、大米和燕麦等谷物。ZEA具有和雌激素类似的结构，可与雌激素受体结合，发挥雌激素效应，其作用强度为雌激素的十分之一。ZEA可引起卵巢病变，干扰动物排卵、延长发情间期、减少胎仔数或引起不孕等 ^[1]。
我国规定谷物及其制品中的玉米赤霉烯酮限量指标为小于等于60μg/kg ^[2]，一般采用液相色谱、气相色谱和试剂盒等方法进行检测。
本文通过对国家标准GB 5009.209-2016 ^[3]/第一法进行优化，分别对方法检出限浓度、定量限浓度、限量指标浓度等进行加标实验，结果表明，用HPLC法进行ZEA质量浓度的测定，回收率和精密度均满足GB/T 27404-2008 ^[4]的要求。
1 试剂和材料
超纯水、乙腈（色谱级）、甲醇（色谱级）、ZEA标准物质（PriboLab）、提取液（乙腈：水=84:16，v/v） ^[5]、PBS缓冲液（Hyclone）、吐温-20、ZEA免疫亲和柱（Romer）。
2 仪器
安捷伦1100高效液相色谱仪、荧光检测器、离心机、氮吹仪。
3 标准溶液
3.1 标准储备液：准确称取适量的标准品(精确至0.0001g)，用乙腈溶解，配制成浓度为100μg/mL的标准储备液，-18℃以下避光保存。
3.2 标准工作液：用流动相稀释，配制成10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的系列标准工作液，4℃避光保存。
4 实验方法
4.1 提取
本次实验采用市售玉米碴，经过高速粉碎机粉碎后，准确称取5g（0.001g）放于50mL离心管中，加入20mL提取液，涡旋振荡2min后，置于离心机中，8000rpm离心10min。上清液通过玻璃纤维滤纸过滤，弃去初滤液3mL，收集余下滤液。准确吸取3mL滤液于50mL离心管中，加入25mL PBS缓冲液，混匀。
4.2 净化
将免疫亲和柱恢复至室温后与固相萃取装置连接，再将上样器连接于小柱上端，加入样品与PBS混合液，使混合液缓慢通过小柱，弃去流出液。待混合液完全流出小柱时，先向上样器中加入10mL0.1%吐温-20进行淋洗，再加入10mL水继续淋洗，弃去全部流出液。最后将小柱下方连接5mL收集管，用0.5mL甲醇洗脱3次，收集洗脱液。
4.3 浓缩
将收集到的1.5mL左右的洗脱液于低于45℃氮气缓缓吹干，再用流动相重新溶解并定容至1mL，过0.22μmPTFE滤膜，待上机。
4.4 空白试验
不称取样品，按4.1~4.3的步骤做空白试验。
4.5 色谱条件
色谱柱：迪马科技C18色谱柱，4.6mm×150mm，5μm；流动相：乙腈+水+甲醇=46+46+8，体积比；流速：1mL/min；检测波长：激发波长274nm，发射波长440nm；进样量：40μL；柱温：35℃。
5 结果与讨论
5.1 标准曲线

图5.1和5.2可以看出，在ZEA的浓度为10ng/mL~ 500ng/mL范围内，y=0.037x-0.059，r=0.99998。因此，可以用外标法进行ZEA质量浓度的测定。ZEA的质量浓度=（峰面积+0.059）/0.037。 5.2 回收率与精密度
本次实验中，空白试验与样品中均未检出ZEA。加标试验结果见表5.1。
5.3 讨论
本次实验较之国标方法，减少了取样量以及上机检测的进样量，通过浓缩重溶等方式保证了上机检测浓度，提高了检测效率。加标试验结果可达到国标GB 5009.209-2016[3]/第一法的检出限，并满足GB/T 27404-2008对方法确认的要求，证明本方法在实验室中检测玉米中的ZEA含量是可行的。
参考文献：
[1] 高爽，梁珍，邓俊良，杨颜铱，陈芸.玉米赤霉烯酮和脱氧血腐镰刀烯醇对雌性动物的生殖毒性及作用机制，动物营养学报，2016,28（4）：1042-1049.
[2] 金博宝188官网注册国家标准 食品中真菌毒素限量，GB 2761-2011.
[3] 金博宝188官网注册国家标准 食品中玉米赤霉烯酮的测定，GB 5009.209-2016.
[4] 实验室质量控制规范 食品理化检测，GB/T 27404-2008附表F.1和F.2.
[5] 朱孟丽，彭聪，洪振涛.高效液相色谱法对饲料中玉米赤霉烯酮的测定，饲料工业，2007年第28卷第1期，37-38.