ELISA基本原理与常见类型

　　该检测法的基本原理是将相关抗原或抗体提前结合到某种固相载体表面，在检测过程中，受检样品与酶标抗原或抗体会按照相应的程序与结合在固相载体上的相关抗原或抗体产生反应，生成新的抗原或抗体复合物。当反应结束后固相载体上酶标抗原或抗体被结合量(即免疫复合物)和标本中待检抗体或抗原的量成一定比例。随后将反应液中的其它物质清除后，加入相关酶反应底物，固相载体上的酶会直接将底物催化为有色产物。最后，通过对有色产物进行定性或定量分析即可确定待检样品中相关物质的含量。ELISA技术常见类型：(1)双抗体夹心法：该检测法适合检测拥有多个抗原决定簇的抗原，但由于农药分子通常为半抗原，即只有一个抗原决定簇，因此，不适合农药检测。(2)简接ELISA法：对抗体无严格要求，只需改变包被抗原便能检测相应的抗体。(3)竞争ELISA法：可检测抗原，也可检测抗体。待测抗原(抗体)与酶标抗原(抗体)通过与固定化抗体(抗原)间的竞争，获得与检测目的抗原(抗体)结合的机会。

　　ELISA法在食品农药残留检测中的应用

　　目前，有机磷农药是我国农业生产中最常用的农药，常见类型包括甲胺磷、敌敌畏、氧乐果、对硫磷、敌百虫等。大部分为高毒类农药，通过降低生物体内胆碱酯酶活性，引起迟发性神经毒性，从而达到消灭害虫的目的。农药残留在人体内蓄积后可造成慢性中毒，具体表现为神经功能紊乱、精神错乱等。王华等研制出竞争酶联免疫检测试剂盒，可用于检测果蔬中含有的甲胺磷含量，最低检测限为0.01g/ml，线性检测范围在0.01～100g/ml[2]。该试剂盒具有非常高的特异性，且回收率至少在93%以上，在4℃条件下可保存半年以上。

　　这是一种仿生杀虫剂，模拟天然除虫菊素结构达到杀虫的目的。这类农药的用量仅次于有机磷农药。若长期食用含有拟除虫菊酯类农药的食物容易引起慢性中毒。通过碳二亚胺法把相关半抗原与牛血清偶联制成免疫原，形成联苯菊酯的竞争间接酶联免疫检测法。在合适的条件下，此法的检出限值可降到(0.016±0.002)mg/L，并和其它菊酯类农药不会发生交叉反应。此类农药对人体的危害与有机磷农药比较相似。吴慧明等开发了一种直接ELISA试剂盒，可用于检测土壤中残留的克百威含量，其最低检测限位0.01mg/L，线性检测分为在0.01～10mg/L之间[3]。另外，现已研制出定量定性检测速灭威的间接竞争ELISA法，对此种农药的检出限在0.08～0.10g/ml之间，检测线性范围在1～10000g/L。

　　苏丹红是一种工业染色剂，成本低，被非法用作食品添加剂，常见于辣椒粉与咸鸭蛋中。这给公众造成了极大的恐慌。目前，已研制出基于单克隆抗体的间接竞争性酶联免疫吸附法，对苏丹红有非常高的灵敏度，操作简单，适合大批量检测，成本低。盐酸克伦特罗(即“瘦肉精”)曾被广泛用于畜牧养殖业，以提高瘦肉率。目前，通过竞争酶联免疫法能快速检测出猪尿、猪肝内的“瘦肉精”残余量，可重复使用，成本低廉。

　　关于ELISA的研究尽管只有短短的几十年，但在农药残留分析方面的成果已非常显著。不仅形成了对多种农药的ELISA检测技术，并且还研制出用于不同农药检测的ELISA试剂盒。这些试剂盒具有操作方便、快捷、准确、灵敏等优点，常用于现场食品检测。与其它检测法相比，ELISA技术拥有很多优势，但仍存在一些不足，比如，对试剂选择性较高，无法同时分析多种成分，对结构相似的化合物可能出现交叉反应。