食用油中黄曲霉毒素的测定

2016-01-05 10:42:58 来源：

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利用SepLine全自动固相萃取仪
测定食用油中的黄曲霉毒素

北京莱伯泰科仪器股份有限公司/康锐

前言：
黄曲霉毒素对人和动物健康具有极大的危害，其中以黄曲霉毒素B1毒性最大，属特剧毒的毒物范围。引起人的中毒主要是损害肝脏，发生肝炎肝硬化，肝坏死等，急性中毒严重者会出现水肿昏迷，以至抽搐而死。黄曲霉毒素是目前发现的最强的致癌物质，主要诱使动物发生肝癌，也能诱发胃癌、肾癌、直肠癌及乳腺、卵巢、小肠等部位的癌症。
本文建立了SepLine-S4全自动固相萃取仪测定食用油中的黄曲霉毒素B1的方法。系统的密闭性及溶剂回收功能，可保护操作人员免受有毒有害物质的危害。同时降低了实验室工作量，提高了工作效率，保证结果的平行性和准确性，具有较高的回收率。

实验部分：

1.1仪器与试剂
SepLine-S4 全自动固相萃取仪（莱伯泰科有限公司，美国）；
ACQUITY UPLC 超高效液相色谱仪，配备荧光(FLR)检测器（沃特世，美国）；
黄曲霉毒素B1标准溶液，浓度2.0μg/ml，溶于苯-乙腈（98:2）溶液；
甲醇（色谱纯），超纯水；
Aflatoxin B1 Columns (1ml) 免疫亲和柱（Beacon，美国）。
1.2标准物质的处理
1.2.1标准储备液：移取1.5ml黄曲霉毒素B1标准溶液，用甲醇定容在10ml容量瓶中，配置成300ng/ml的标准储备液，于4℃冰箱中避光保存。
1.2.2标准使用液：移取标准储备液0.2ml，用甲醇-水（1:1）溶液定容在10mL容量瓶中，配置成6ng/ml的标准使用液，现配现用。

1.3 样品的处理
1.3.1样品的提取
选取市售的菜籽油，香油各一份。另有已知含黄曲霉毒素B1的花生油一份（含量已知）。
称取5g食用油于50ml离心管中，加入25ml甲醇-水（7:3）溶液，涡旋震荡约1min，待震荡均匀后超声提取10min。将提取液通过滤纸过滤，吸取5ml滤液至SepLine进样瓶，再加入10ml的水，混合均匀等待净化上样。
1.3.2加标样品的提取
同样称取1.3.1中选用的菜籽油及香油5g，向离心管中加入1ml黄曲霉毒素B1的标准使用液(加标标准为1.2ng/g)，之后的提取过程与1.3.1完全一致。
1.3.3样品的净化
将Aflatoxin B1免疫亲和柱的两端盖子去掉，倾倒出里面的保护液，放入SepLine萃取柱架中。注意随用随放，不可提前倒掉保护液使柱子干掉。
固相萃取方法编辑如下：

步骤	溶剂	体积(ml）	流速(ml/min)	干燥时间(sec)	是否收集
上样	Sample	12.0	1.0	0.0	N
淋洗	甲醇-水（3:7）	2.0	1.0	0.0	N
淋洗	水	10.0	1.0	30.0	N
洗脱	甲醇	1.0	1.0	10.0	Y
洗脱	水	1.0	1.0	60.0	Y

经SepLine固相萃取仪净化后的样品，再经过滤膜过滤，待检测。
1.4 UPLC检测条件
色谱柱：C18 (250mm×4.6mm,5μm)；
柱温：35℃；
流动相：甲醇-水（1:1）
流速：0.5ml/min；
FLR检测器激发波长：360nm；发射波长：440nm；
进样量：5μL。

结果与讨论

2.1 黄曲霉毒素B1标准使用液（6ng/ml）的液相色谱图

2.2菜籽油样品色谱图

未检出

2.3菜籽油加标样品色谱图

2.4香油样品色谱图

未检出

2.5香油加标样品色谱图

206已知黄曲霉毒素B1含量的花生油样品色谱图

2.7计算菜籽油和香油样品的加标回收率及相对偏差，回收率均在86.88%～102.08%之间，RSD均在5%以下，具体见下表：

样品	黄曲霉毒素B1的加标回收率（%）				标准偏差
样品	一	二	三	平均	标准偏差
菜籽油	97.91	102.08	95.21	98.40	3.52%
香油	95.00	86.88	90.21	90.70	4.50%

已知黄曲霉毒素B1含量的花生油检测结果为：

样品	黄曲霉毒素B1的浓度（ng/g）				已知含量(ng/g)	偏差
样品	一	二	三	平均	已知含量(ng/g)	偏差
花生油	22.74	23.17	22.82	22.91	23.00	0.39%

结论：
本方法采用SepLine全自动固相萃取仪，利用Aflatoxin B1免疫亲和柱对菜籽油、香油及花生油进行提取净化，采用配备荧光检测器的UPLC检测黄曲霉毒素B1，平均回收率达到90%以上，RSD均小于5%。实验过程自动化程度高，平行性好，结果数据理想，且能最大限度的保护操作人员免受有毒有害物质的危害，能够完全满足食用油中黄曲霉毒素的检测要求。

参考文献：