□ 北京莱伯泰科仪器股份有限公司 供稿

　　本文介绍的方法采用PrepElite-GVS(浓缩系统-GPC凝胶净化系统-SPE分离系统)全自动样品前处理平台对牛奶样品进行GPC和C18固相萃取柱净化，并采用液相色谱串联质谱分析检测其中的3种硝基咪唑类药物残留，3种硝基咪唑类药物残留的回收率均在60%～85%之间，RSD均小于7%。

　　在样品前处理过程中，往往包括很多步骤，并且步步相连。莱伯泰科(LabTech)经过多年在样品前处理领域的大力开拓，大力推出有机分析样品前处理整体解决方案——全自动样品前处理平台，平台由三部分组成(浓缩系统-GPC凝胶净化系统-SPE分离系统)，这不但能满足单一步骤的实验需求，而且可以实现多个产品的在线联机，大大简化繁琐的样品前处理流程，降低实验室工作量，提高工作效率，保证结果的平行性和准确性，同时系统的密闭性及溶剂回收功能，也可保护操作人员免受有毒有害物质的危害。平台广泛应用于环境、食品检测、农产品检测、生命科学等领域。

　　硝基咪唑类药物(Nitroimidazoles)是带有硝基的咪唑化合物，其性状为白色或淡黄色结晶，弱碱性，能和酸结合成盐，遇光易分解，易溶于甲醇，微溶于水，主要用于预防和治疗家禽的滴虫病、猪的出血性下痢及厌氧菌感染，并具有促生长作用，但是该类药物对哺乳动物具有致癌、致畸、致突变作用和遗传毒性。常见硝基咪唑类药物包括甲硝唑(Metronidazole)、氯甲基硝唑(5-Chloro-1-methyl-4-nitroimidazole)和苯并咪唑(5-Nitrobenzimidazole)等。这些药物在动物体内通过C2侧链的氧化而被快速代谢，代谢物与原药具有相似的潜在毒性。欧盟、北美和中国等都禁止了硝基咪唑在食品动物中的使用。因此建立动物食品中尤其是牛奶中硝基咪唑类药物残留的检测方法具有重要意义。

　　本文使用PrepElite—GVS全自动样品前处理平台使牛奶中硝基咪唑类药物残留检测繁琐的前处理过程自动化，大大简化了人工操作，并且有较理想的结果。

　　实验

　　仪器与试剂

　　PrepElite-GVS: AutoClean全自动凝胶渗析色谱净化系统，附凝胶色谱柱Bio-Beads SX3,20×300mm;Sepline全自动固相萃取系统;LiqVap全自动定量浓缩系统(莱伯泰科有限公司);

　　LC-MS/MS 8030(岛津);

　　C18固相萃取柱(LabTech，1000mg/6mL);

　　硝基咪唑类药物标准品：甲硝唑(纯度≥99.5%)，苯并咪唑(纯度≥98%)，氯甲基硝唑(纯度≥97.5%);

　　乙酸乙酯(分析纯和色谱纯),环己烷(分析纯)，乙腈(分析纯);氯化钠(分析纯)，磷酸氢二钾(分析纯)，无水硫酸钠(分析纯)，甲醇(色谱纯)，所用水均为超纯水。

　　标样和样品处理

　　标准溶液的配置

　　标准储备液：分别称取10.0mg标准品，用甲醇溶解并定容于10mL容量瓶中，该溶液浓度为1mg/mL，避光保存于-20℃。

　　混合标准中间液：分别吸取储备液1mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容，该溶液浓度为100μg/mL。

　　混合标准工作液：用流动相比例水∶甲醇(85∶15)稀释混合标准中间液到合适的浓度。

　　样品配置

　　在超市购买新鲜的牛奶，以待实验用。

　　样品提取方法

　　吸取牛奶试样5.0mL，置于50mL离心管，加5mL乙腈，并用20mL乙酸乙酯进行提取，超声10min，离心，收集上清液;再加入20mL乙酸乙酯重复提取一次。合并收集液，用无水硫酸钠脱水，过滤纸。氮吹近干滤液，乙酸乙酯∶环己烷(1∶1)定容，供GVS净化。

　　样品净化方法

　　在PrepElite-GVS全自动样品前处理平台软件上编制硝基咪唑类药物的净化方法。

　　GPC馏分收集液在LiqVap定量浓缩近干并用甲醇置换(浓缩至5mL)。系统自动进行C18固相萃取：柱活化，上样体积4mL，洗脱体积15mL、氮气吹干。SPE上样液和洗脱液在LiqVap浓缩近干，并用水∶甲醇(85∶15)置换，过滤膜，进LC-MS/MS检测。

　　LC-MS/MS的条件

　　液相色谱条件：色谱柱：VP-ODS 150×2mm，2μm;柱温：35℃;流动相：A-0.1%甲酸水溶液，B-甲醇;流速0.25mL/min，等度洗脱程序，A∶B(85∶15)。进样量：10μL。

　　质谱条件：电喷雾离子源正离子模式(ESI+);监测模式：多反应监测模式(MRM)参数，见表1;脱溶剂管：250℃，加热模块：400℃;雾化气流速2L/min，干燥气流速5L/min。硝基咪唑类药物标液(200 ppb)GVS净化后的TIC谱图，见图2。

　　结果与讨论

　　牛奶样品中硝基咪唑类药物加标进GVS的回收率及RSD

　　采用加标样品(加标浓度0.2mg/L)，经提取、GVS净化处理，并用LC-MS/MS分析，计算加标回收率及相对标准偏差。3种硝基咪唑类药物的回收率均在60%～85%之间，RSD均小于7%，见表2。

　　结论

　　本方法对牛奶样品提取，并采用PrepElite-GVS(浓缩系统-GPC凝胶净化系统-SPE分离系统)全自动样品前处理平台进行GPC和C18固相萃取柱净化，并采用LC-MS/MS检测其中的硝基咪唑类药物残留，3种硝基咪唑类药物的回收率均在60%～85%之间，RSD均小于7%。实验过程自动化程度高，操作简单，结果显示数据理想，可用于常规的牛奶中硝基咪唑类药物残留的检测。