□ 珀金埃尔默股份有限公司 供稿

　　美国食品质量保护法(FQPA)和欧盟91/414/EEC指令规定，如果农药在食品中存在，其含量应该低于农药带来健康风险的量。随着农业生产的大规模发展，上个世纪已经合成了数百种农药，并且被广泛的用于保护农作物。较新的农药被合成并持续用于农作物，这就使得食品和环境中的目标(或预期分析物)和非目标的农药分析都非常重要。与四级杆的质谱仪仅测定目标分析物不同(定义选定离子的多反应监测或MRMs)，时间飞行(TOF)质谱仪可测定目标和非目标的分析物。飞行时间质谱仪可以采集全部谱图信息，因此可用于重新分析那些存在的“非目标”的化合物。建立一种生菜叶中农残分析的方法，生菜叶使用QuEChERS法进行提取(快速、简单、便宜、高效、耐用和安全)。生菜叶的提取液中加入了130种不同浓度的农药，利用PerkinElmer AxION®2 TOF MS作为检测器的超高效液相色谱质谱联用仪(UHPLC-MS)进行分析，能够很好的测定大多数的农药，且满足EU指令10ppb的检测限(LOD)要求。利用AxIONSoloTM高通量的软件对数据进行进一步的分析，当存在的化合物浓度超过10ppb的阈值时，会被标记为特定的颜色，这将有助于快速筛查样品中是否存在加入的130种分析物。与时间短及强大的筛选软件相结合，有助于简化分析，从而减少分析时间。

　　试验条件

　　样品制备

　　有机生产的生菜样品采用QuEChERS法进行制备，10g生菜叶均质加入农药标准品(不同浓度)和10mL乙腈后，加入盐(1g氯化钠，4g硫酸镁，1g柠檬酸纳和0.5g柠檬酸氢二钠)，振摇并离心(3700rpm)。取上清液1mL转移至含有伯胺及仲胺(PSA，50mg)和硫酸镁(150mg)的SPE微离心管中，混合物振摇(30S)，离心(3700rpm，1min)，取上清液(1mL)通过加入含有5%甲酸(10μL)的乙腈进行酸化，进样前过滤(0.2mmPTFE滤膜)。

　　LC条件

　　泵：PerkinElmer FlexarTM FX-15泵;

　　流动相A：含有0.1%甲酸的水;

　　流动相B：含有0.1%甲酸的乙腈;

　　梯度条件：开始梯度B泵比例为5%，5min内B泵比例从5%升至90%并维持2min;

　　使用色谱柱：PerkinElmer BrownleeTM SPP C-18，2x50mm, 2.7μm;

　　流速：0.4mL/min;

　　进样体积：4μL，局部进样模式。

　　质谱条件

　　质谱仪：PerkinElmer AxION2 TOF;

　　离子源：PerkinElmer UltrasprayTM 2(双ESI源);

　　离子化模式：阳离子;

　　毛细管出口电压：100V;

　　脉冲捕集模式：100～1000m/z D7:65,D8:92)，内标使用m/z118.08625和922.00979作为质量锁定离子。

　　结果与讨论

　　130种农药标准品在7min之内分离完成(图1)，AxION 2 TOF使用其自身的TrapPulseTM模式，增加TOF的工作周期，从而显著提高信号强度。

　　AxION Solo软件能够快速的鉴定130种农药是否存在于通过QuEChERS法处理的生菜叶提取液中。AxION Solo可以精确地从分析物中自动提取目标化合物的离子色谱。该软件可以轻易的从Excel表格导入目标化合物信息，包括化合物名称和元素组成(图2)。该软件可以针对该目标列表中存在的[M+H]+离子或者任何加和离子(Na+,K+等)在几百个分析物中进行检索。除了谱图检索外，该软件还可以根据用户定义的保留时间窗口进行搜索，从而进一步提高了目标分析物的特异性检测。即使在低至10ppb的浓度条件，生菜提取液中的目标化合物质量准确度误差也小于5ppm，满足规范的要求。根据所有同位素的精确的质量和准确丰度比，AxION Solo软件对目标化合物进行确证。AxION Solo软件可以快速目测样品中是否存在分析物(图3)。单个存在的农药会被标记为不同的颜色以便于识别。除了“目标视图”外，还允许个别目标农药在一组设定的样品中快速被显现，同时，可以获得一个选定样品中所有目标化合物存在或不存在的信息，见图3所示。

　　由于欧盟限定食品中农药额含量不超过10ppb，数百批次的样品进行数百个农药的筛查非常耗时。AxION Solo软件可以在存在农药浓度超过10ppb时快速的实现可视化。利用软件提供的非常丰富的匹配列表信息，给定的农药峰面积阈值可根据10ppb标准品进行设置或自定义设定，此外峰面积的阈值也可以设定为其与内标峰面积的比。利用可视化的软件，样品峰面积超过设定的阈值，将被标记为另外一种颜色(图4A和4B)。采用这种易于阅读的彩色编码视图，可以非常迅速的鉴定那些含有超过法规限定含量农药的样品，单个或批量样品可以通过软件快速生成报告。批量的报告可以被导入Excel表格，以便进一步分析。

　　结论

　　AxION 2 TOF MS能够非常容易的测定浓度低于或等于10ppb的法规常规限定的农药。精确的质量和保留时间均可用于鉴定样品中的农药。利用强大的高通量AxION Solo软件，采用一种易于阅读的彩色编码方案，可以快速鉴定大批量样品中数百种农药是否存在。再者，该软件允许用户自定义每个分析物积分的峰面积阈值，从而可以快速的将含有或超过法规规定10ppb浓度的样品分析显示出来。